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血管性假血友病因子

基本信息

  • 专科分类：
  • 检查分类： 血液检查
  • 适用性别： 男女均适用
  • 是否空腹： 　空腹
  • 手术参考价： 55元
  • 科　室：

血管性假血友病因子检查简介

用因子Ⅷ相关抗原(ⅧR∶Ag)单种抗血清与琼脂混合制成薄板，加入一定量的受检血浆(抗原)，通电后，在电声作用下形成特异的火箭样免疫沉淀峰，此峰的高度与抗原浓度成正比。

血管性假血友病因子检查过程

取材：血液

血管性假血友病因子的测定原理：在含抗血管性血友病因子相关抗原（VWF∶Ag）抗体的琼脂板中，加入一定量的受检血浆（抗原），在电场作用下，定量的抗原在含定量抗体的琼脂中泳动。在一定的时间内出现抗原抗体反应所形成的火箭样沉淀峰，该峰的高度与抗原浓度成正比，以此可以计算VWF∶Ag的量。此法为Laurell免疫火箭电泳法。

试剂：

（1）三羟甲基氨基甲烷（Tris）-巴比妥缓冲液（pH值8.8）：巴比妥钠4.88g，巴比妥1.235g，Tris2.890g，加水至1L。

（2）9g/L琼脂糖：琼脂糖0.9g，Tris-巴比妥缓冲液100ml。将琼脂糖置于Tris-巴比妥缓冲液中，加热溶解，乘热用薄层棉花过滤后使用。

（3）血清：兔抗人VWF∶Ag抗血清。

（4）4.4mmol/L磷钼酸溶液：磷钼酸10g，加水至1L，溶解后用滤纸过滤使用。

（5）有机玻璃框：框内径8cm×8cm，厚1.5mm。

操作方法：

（1）取一定量VWF∶Ag抗血清，用三羟甲基氨基甲烷-巴比妥缓冲液稀释10倍，另取5g/L琼脂糖三羟甲基氨基甲烷-巴比妥缓冲液隔水融化，冷却至56℃。然后将预温至56℃的稀释VWF∶Ag抗血清1∶60混合（视抗体效价而定），制成8cm×8cm、厚1.5mm的琼脂板，距玻板一边约2cm处打一排小孔，径孔3mm，孔间距为5mm。

（2）将琼脂板置于电泳槽内，孔朝阴极，用滤纸作盐桥，用定量注射器吸取原血浆1∶2、1∶4、1∶8、1∶16等不同倍数稀释的健康人血浆各10μl，分别加入抗体琼脂板小孔里。待检血浆样品用Tris-巴比妥缓冲稀释1倍后，加入各样品孔内。每孔加量均为10μl。

（3）电泳条件：电泳110～150V，电流约5mA/块板，时间18h，温度低于15℃。

（4）电泳完毕，取出凝胶板浸于4.4mmol/L磷钼酸染色液中20min以上，然后再放入生理盐水中浸泡10min，即可见明显火箭状沉淀峰，也可用氨基黑按常规方法染色。

（5）染色后，用双分规测量火箭电泳峰的高度（从加样孔上缘到峰顶），将标准血浆5个读数，通过回归方程得出标准曲线，然后求出各测定样品VWF∶Ag的含量，再乘以稀释倍数（×2），即样品实际浓度。表示相当于正常血浆的百分率。

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