血清丙氨酸氨基转移同工酶

血清丙氨酸氨基转移同工酶注意事项

(1)ALT测定中存在着两个副反应：

①血清中存在的α-酮酸(如丙酮酸)能消耗NADH：

②血清中谷氨酸脱氢酶(GLDH)增高时，在有氨存在的条件下，亦能消耗NADH：

(上述副反应都能消耗NADH，使340nm处吸光度下降值(-△A/min)增加，使测定结果偏高。因此，在单试剂法中必须要有足量的LDH(如2000U/L，Scandinavia法;1200U/L，IFCC)，才能保证α-酮酸(尤当遇到丙酮酸含量升高的标本)引起的副反应在规定的延滞期内进行完毕。这样，LDH含量高，试剂成本提高。目前，推荐双试剂法，因孵育期长，能有效地消除干扰反应，提高测定

准确性，是ALT测定的首选方法。双试剂法可适当地降低试剂中LDH的用量。至于NH4+的干扰，除严重肝病时血清谷氨酸脱氢酶活性增高和血氨增高时外，一般说血清中NH4+的含量甚微，此干扰反应不大。但LDH原试剂往往是用饱和硫酸铵配制的，厂方在使用前必须经过严格的脱氨处理。

(2)血清ALT活性>1000/L(37℃)的样品，或读数开始时吸光已很低的样品(因ALT活性很高，NADH在读数开始前的温育期内已经耗尽所致)，须用0.9%生理盐水溶液作适当稀释后重新测定，测定结果乘以稀释倍数。

(3)IFCC推荐法中使用了ALT的辅酶P-5'-P，即使正常血清试剂中加或不加P-5'-P测得的ALT活性也有明显差别(表3)。在某些病理情况下(如VitB严重缺乏)不加P-5'-P将导致ALT测定结果严重偏低。加入后则可使ALT活性明显升高。由于种种原因，目前市售ALT测定试剂盒多末加入P-5'-P。为使同一实验室的ALT测定结果稳定，加或不加P-5'-P的ALT测定试剂不宜混用。

(4)ALT测定试剂中使用Tris缓冲液为宜。据报道：①NADH在Tris缓冲液中稳定性较高;②P-5'-P在Tris缓冲液中，显示出更有效的激活作用。

(5)试剂空白测定值：以蒸馏水代替血清，测定ALT活力单位，规定测定值应小于5U/L。试剂空白的读数是由于工具酶中的杂酶及NADH自发氧化所引起。在报告结果时应扣去每批试剂的空白测定值。

(6)正常新生儿ALT水平比成年人约高2倍，出生后约3个月降至成年人水平。新生儿，尤其未成熟儿，肝细胞膜通透性较大，ALT从肝细胞渗入血浆，使血清ALT水平升高。

(7)酶连续监测法测定中，要求使用的分光光度计，带宽≤6nm，比色杯光径1.00cm，具有30℃或37℃恒温装置，能自动记录吸光度的动态变化。

(8)血清不宜反复冰冻保存，以免影响酶活性。血清置4℃冰箱1周，酶活性无显著变化。不推荐冰冻保存ALT测定标本。