热盐水试验

• 专科分类： 心血管
• 检查分类： 血液检查
• 适用性别： 男女均适用
• 是否空腹： 　空腹
• 手术参考价： 25元
• 科　室： 心血管

1.样本处理

a.组织匀浆：称取100~200mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干，用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0mL预冷的LysisBuffer，再加入50ulReagentA，0℃冰浴中上下研磨组织20次;有未研磨开的组织，可用双层纱布过滤。

b.培养细胞匀浆：消化细胞，PBS洗涤，800×g5~10min离心收集细胞。计数。每次提取需要5×107个细胞，加入1.0mL冰预冷的LysisBuffer重悬细胞，再加入50ulReagentA，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨细胞20~30次。

2.将组织或细胞匀浆物转移到1.5ml离心管中，4℃，700×g离心5min。细胞核沉淀在收集管底部，弃上清。加入0.5mL冰预冷的LysisBuffer重悬沉淀;

3.取另一新离心管内加入0.5mLMediumBuffer，吸取上一步的重悬液，沿管壁小心地加入到此离心管中,置于MediumBuffer之上,4℃，700×g离心5min。将上清转移到新离心管，细胞核沉淀在管底;

5.弃上清，在细胞核沉淀中加入0.5mLLysisBuffer重悬细胞核沉，1000×g离心10min，弃上清，得较纯的细胞核沉淀;

6.用50-100μLStoreBuffer或合适的反应缓冲液重悬细胞核沉淀，立即使用或-70℃保存。