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血清乳酸脱氢酶

基本信息

  • 专科分类: 心血管
  • 检查分类: 生化检查
  • 适用性别: 男女均适用
  • 是否空腹:  空腹
  • 手术参考价: 10元
  • 科 室: 心血管

血清乳酸脱氢酶检查简介

乳酸脱氢酶(LDH或LD)是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一,可催化丙酮酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应,也可催化相关的α-酮酸。LDH广泛存在于人体组织中,以心、肾、骨骼肌含量最高,肝、脾、胰和肺组织次之。LDH测定方法主要有比色法和连续监测法。

血清乳酸脱氢酶检查过程

取材:血液

原理:

(1)比色法:LDH以NAD+作氢的受体,催化乳酸脱氢,生成丙酮酸,后者与2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液呈红色,根据颜色深浅求出酶活性。

(2)连续监测法:LDH可催化L-乳酸生成丙酮酸,同时NAD+还原成NADH,在340nm处吸光度的增高速率与酶活力成正比。

试剂:

(1)比色法:

①底物缓冲液(含0.3mol/L乳酸锂,pH8.8):取乳酸锂2.88g,二乙醇胺2.1g,加蒸馏水约80ml溶解,以1mol/LHCl调pH8.8,加水至100ml。

②11.3mmol/L辅酶Ⅰ(NAD)溶液:称氧化型辅酶Ⅰ15mg,溶于20ml蒸馏水中,冰箱保存可用2周。

③1mmol/L2,4-二硝基苯肼(DNPH)溶液:称取DNPH200mg,加10mol/LHCl100ml,溶后加水至1000ml,置棕色瓶内室温保存。

④0.4mol/LNaOH溶液。

⑤1mmol/L丙酮酸标准液:称取丙酮酸钠(AR级)11.0mg,以底物缓冲液溶解并稀释至100ml,临用前配制。

(2)连续监测法:

①55mmol/L乳酸锂Tris缓冲液:称取乳酸锂5.28g,Tris6.68g,溶于800ml蒸馏水中,在37℃水浴箱中用1mol/LHCl调pH至8.9(约需46ml),加水至1000ml,冰箱保存。

②12mmol/LNAD溶液:称取NAD79.6mg,溶于10ml蒸馏水中,冰箱保存可用2周。

③基质应用液(含NAD6mmol/L):根据当天用量将上述NAD溶液和乳酸钾Tris缓冲液等量混合即可。商品试剂盒按其说明溶解,恢复至室温25℃使用。

操作方法:

(1)比色法:按表1操作。

混匀,室温放置5min后,在440nm波长,比色杯光径1.0cm,蒸馏水调零点,读取各管吸光度,以AU-AC之差值查标准曲线,求出LDH活力单位。

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