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端粒酶活性

基本信息

  • 专科分类： 肿瘤科
  • 检查分类： 免疫检查
  • 适用性别： 男女均适用
  • 是否空腹： 　非空腹
  • 手术参考价： 32元
  • 科　室： 肿瘤科

端粒酶活性检查简介

端粒是真核生物染色体末端的一种特殊结构，由一富含鸟嘌呤的重复DNA序列及其相关蛋白组成。端粒是保护染色体末端稳定必不可少的结构。端粒长度的维持需要端粒酶活性的存在。永生细胞和肿瘤细胞能够长期生存，端粒酶起到了重要的作用。端粒酶是由RNA和蛋白体组成的复合体，属一种专一的依赖RNA的逆转录酶，能以自身的RNA为模板，从头合成染色体末端的端粒DNA，弥补细胞分裂时端粒DNA的丢失，维持端粒的长度，保持染色体的动态平衡，使细胞获得永生化。自1994年Kim建立了高敏感度的、以PCR为基础的检测端粒酶的方法以来，端粒酶引起了人们的广泛关注。人们发现，端粒酶与细胞的增生、分化和不死性有着极为密切的关系，已成为目前肿瘤和衰老基础研究的热点之一。

端粒酶活性检查过程

基因组DNA为0.1μg；缓冲液含50mmol/L氯化钾，10mmol/LTris-HCl（pH8.4），1.5mmol/L氯化镁，100μg明胶；每一引物为0.25μmol/L；dATP，dCTP，dGTP，dTIP各为200μmol/L；DNA聚合酶为2.5U，终体积为100μl。加数滴液体石蜡防止蒸发。
反应周期：①变性：90℃30～60s；②引物和模板的退火温度：40～60℃30～60s；③延伸：72℃1～2min。经反复循环30～40次，最后1次72℃引物延伸7min后终止。除去液体石蜡后，产物可供分析。经琼脂糖凝胶电泳后，用溴乙锭染色，经紫外灯照射可见预料扩增长度的荧光条带。产物也可与放射标记或非放射标记的寡聚核苷酸探针行Southern印迹杂交或点渍印迹杂交。如用PCR自动仪则更为方便，将反应试剂、DNA模板及Taq-DNA聚合酶加入试管后，放进已调好程序，即所需变性→退火→延伸各自的温度和时间及循环次数的自动仪中进行反应，即可获得满意的扩增产物。

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