抗丁型肝炎病毒IgM抗体

• 专科分类： 传染病检查
• 检查分类： 肝功能检查
• 适用性别： 男女均适用
• 是否空腹： 　空腹
• 手术参考价： 40元
• 科　室： 传染病检查

化验取材：血液

抗丁型肝炎病毒IgM抗体的测定原理：根据免疫学中抗原，抗体之间的特异性结合的原理，利用抗人免疫球蛋白IgM捕捉待检血清中的IgM，然后加入丁型肝炎病毒抗原（HDAg）使之与血清中IgM抗HDV抗体结合，然后利用酶标记的抗-HDVIgG，它即具有与HDAg相互反应的免疫学特异性，又具有酶的催化，放大活性。当加入相应底物后，酶使底物氧化（HRP）或水解（AKP）从而使无色底物变为有色。利用颜色的深浅或A值的高低确定IgM抗HDV抗体的有无和含量的高低。

试剂：

（1）聚苯乙烯塑料板：40孔或96孔板，进口或国产。

（2）可变微量加样器：20μl，100μ1各1支。

（3）抗人IgM（μ链）：鼠抗人IgM单克隆抗体或兔（羊）抗人IgM多克隆抗体。

（4）IgM抗HD阴性，阳性对照血清。

（5）HDAg：大肠杆菌表达的基因工程抗原粗提液。ELISA滴度：1∶640～1∶1280。

（6）HPR-抗HDVIgG：应用改进的过碘酸钠法标记抗HDVlgG多克隆抗体，使用稀释度1∶400～1∶4000（于10%小牛血清的PBS液中）。

（7）包被液：0.05mol/LpH9.5～9.6的碳酸盐缓冲液（Na2CO315.9g，NaHCO329.3g加水到1000ML，1∶10稀释使用）。

（8）洗液：0.01mol/LpH7.2～7.4PBST（内含8.5G/LNaCL，0.5‰Tween20）。

（9）稀释液：0.01mol/LpH7.2～7.4PBS。用于稀释和标记抗体。

（10）底物液：用前新配制。4mg邻苯二胺（OPD）+10ml基质液（pH5.0磷酸，柠檬酸缓冲液，即Na2HPO418.4g、柠檬酸5.1g溶于1000ml离子水中4℃保存备用）待溶化后加3%H2O250μl混合均匀后立即使用。

（11）终止剂：2mol/LH2SO4。

操作方法：

（1）用0.05mol/LpH9.5～9.6的碳酸盐缓冲液稀释抗人IgM单克隆抗体，包被聚苯乙烯板，每孔100μl，放4℃过夜。

（2）用PBST洗3次（中间不停留）拍干。

（3）每孔分别加入100μl1∶1000稀释后的待检血清和阴、阳性对照血清（阴性对照3孔，阳性对照2孔）放37℃1h。

（4）负压下用PBST洗板3次（方法同上）抽干（将血清和废液抽到消毒瓶内防止污染环境）。

（5）每孔加入50～100μl经适当稀释后的HDAg（2～4个ELISA单位）放45℃1h。

（6）洗3次后，每孔加入50μlHRP-抗-HDVIgG抗体（于含1%小牛血清的PBS中）放42～45℃1h。

（7）洗3次后，加50μl新鲜配制的底物液，放室温暗处显色15～30min，当阳性对照显黄色后，每孔加入1滴（25μl）2mol/LH2SO4终止反应。