抑菌圈的大小受多种因素影响，主要包括药物浓度、微生物敏感性、培养基特性以及培养条件等。这些因素相互作用，共同决定了抑菌圈的形成及直径大小。
1、药物浓度
药物浓度越高，其扩散能力和抑菌效果通常越强。高浓度药物在琼脂中扩散范围更广，能形成较大的抑菌圈。但浓度过高可能导致周围菌群完全抑制，反而难以观察明显的圈状结构。
2、微生物敏感性
不同菌种对同一药物的敏感程度差异显著。例如革兰氏阳性菌对青霉素类更敏感，而革兰氏阴性菌可能表现出较强耐药性。实验中菌悬液的浓度需标准化，过高菌量可能减弱抑菌圈清晰度。
3、培养基特性
琼脂浓度影响药物扩散速度，浓度增加会减缓扩散，导致抑菌圈缩小。培养基的营养成分和pH值可能改变药物活性，如酸性环境可能增强某些抗生素的稳定性。
4、培养条件
适宜的温度（通常35-37℃）和充足的培养时间（18-24小时）是形成清晰抑菌圈的关键。温度过高可能抑制微生物生长，时间不足则无法充分展现药物的抑菌效果。
实验中需严格按照标准操作流程控制变量，确保琼脂平板厚度均匀、菌液涂布量一致。若出现异常结果，建议复核药物效价、菌种纯度及培养箱温度校准情况。对于定量分析，应采用标准菌株和参照品进行同步试验。